Post by alamin4470 on Aug 13, 2023 5:39:58 GMT -5
化合物异种抗原 N-羟乙酰神经氨酸 (Neu5Gc) 已被鉴定4。人类不产生 Neu5Gc，但它在猪和其他哺乳动物（包括非人类灵长类动物）中合成。DNA 突变导致人类缺乏胞苷单磷酸-N-乙酰神经氨酸羟化酶 (CMAH)，这种酶负责 Neu5Gc 的产生5。删除 GGTA1 和 CMAH 基因可能会进一步降低猪器官对人类的异种抗原性6。然而，由于可用于猪体细胞基因工程和克隆的传统工具的限制，GGTA1 和 CMAH 基因
纯合敲除（双 KO）的产生受到阻碍。由于需要复杂的电话号码列表表因修饰结合到一种动物中，这些挑战进一步加剧7。 锌指核酸酶 (ZFN) 的开发彻底改变了基因敲除猪的生产。我们评估了这项技术，并成功地连续破坏培养细胞中的 GGTA1 和 CMAH 基因，然后进行 SCNT，以产生可存活的双 KO 猪。这一过程仅用了 7 个月，就显着提高了生产转基因动物的效率，这些动物与人血清的免疫反应性降低。 方法 锌指核酸酶
锌指核酸酶 (。 肝源细胞的细胞培养和转染 分离猪成年肝源性细胞 (LDC)，并在补充有 10% FBS (Hyclone, Logan, UT, USA) 的培养基 (α-MEM:EGM-MV 3:1) (Invitrogen/Lonza, Switzerland) 中培养，10 %马血清（Invitrogen，卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国）、12 m m HEPES 和 1% pen/strep（Invitrogen），如所述8。使用